Criopreservación de Ovocitos (incluye almacenamiento) 

Descripción general 

La crioconservación de ovocitos es una tecnología en crecimiento utilizada para la reproducción asistida que puede ayudar a una variedad de grupos de pacientes. Como resultado, aumentar la eficiencia es fundamental para hacer realidad la enorme promesa de esta estrategia. Sin embargo, además de varias investigaciones que examinan los factores relacionados con la técnica del protocolo, como el tipo de crioprotector (CPA), el tipo de dispositivo de almacenamiento o las tasas de enfriamiento/calentamiento, existen formas más creativas de mejora. Estas técnicas alternativas incluyen el uso de diferentes etapas de los ovocitos, el estudio de los cambios en la composición de los medios basales y los tampones, la automatización de los procesos de intercambio de CPA y la carga del dispositivo, y el examen de la composición celular de los ovocitos para aumentar la criotolerancia. Finalmente, desarrollar marcadores de "éxito" más precisos o perceptivos es fundamental para el progreso continuo. 

¿Qué es la Criopreservación de Ovocitos?  

La crioconservación de ovocitos es el procedimiento de extracción, congelación y almacenamiento de óvulos de una mujer (ovocitos) para mantener el potencial reproductivo en mujeres en edad reproductiva. En 1986 se registró el primer nacimiento humano a partir de un ovocito congelado. En los últimos años, la criopreservación de ovocitos ha evolucionado significativamente, con un mayor éxito general de los óvulos que sobreviven al proceso de congelación. La Sociedad Estadounidense de Medicina Reproductiva ya no la considera una técnica experimental. Los tratamientos que conducen a una mayor supervivencia de los gametos, la fertilización potencial y las tasas de nacidos vivos brindan a las mujeres mucho más control del que era factible incluso hace cinco años.  

¿Quién necesita la congelación de ovocitos? 

La criopreservación de ovocitos se puede considerar por varias razones, que incluyen: 

• Mujeres con cáncer que requieren quimioterapia y/o radioterapia pélvica, lo que puede tener un impacto en la fertilidad. 
• Cirugía que puede resultar en daño ovárico. 
• La insuficiencia ovárica prematura es un riesgo debido a anomalías cromosómicas (p. ej., síndrome de Turner, síndrome de X frágil) o antecedentes familiares de menopausia precoz. 

• Enfermedad ovárica con riesgo de daño ovárico. 
• Las mutaciones genéticas requieren la extirpación de los ovarios (p. ej., mutación BRCA). 
• La preservación de la fertilidad se utiliza para posponer el nacimiento por motivos sociales o personales. 

¿Cómo se realiza la congelación de ovocitos? 

Proceso de congelación de ovocitos: 

Antes del ciclo de estimulación ovárica, su experto en fertilidad de UCLA puede realizar una evaluación de la reserva ovárica para predecir la posible producción de ovocitos. Se realizarán análisis de sangre y una ecografía pélvica como parte de la evaluación. Esto también ayudará a determinar la dosis adecuada del medicamento. La estimulación ovárica se realiza de la misma forma que la fecundación in vitro (FIV), con medicamentos hormonales inyectables. Después de la estimulación, los ovocitos y el líquido circundante en los folículos ováricos se aspiran por vía vaginal mientras la paciente está sedada. 

Bajo el microscopio, se determina la madurez de los ovocitos y los que están maduros se criopreservan. Actualmente, la vitrificación es el enfoque preferido para la crioconservación de ovocitos, que se logra enfriándolos rápidamente en nitrógeno líquido, donde pueden conservarse. 

¿Cómo se utilizarán los ovocitos en el futuro? 

Cuando la mujer está lista para usar los ovocitos congelados para lograr el embarazo, se colocan en una solución de calentamiento y se evalúan. Los ovocitos que sobrevivieron a la congelación se fertilizan con inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), en la que se inyecta un solo espermatozoide directamente en el ovocito, y los ovocitos fertilizados crecerán en cultivo hasta que el (los) embrión (es) esté(n) listo(s) para ser transferido(s) al útero para lograr el embarazo, generalmente 3-5 días después de la fertilización. 

¿Cuáles son las posibilidades de un embarazo exitoso utilizando ovocitos congelados y descongelados? 

Tasas de éxito de congelación de ovocitos: 

Se ha estimado que las tasas de embarazo clínico oscilan entre el 4 y el 12 % por ovocito. Sin embargo, debido a que la congelación de óvulos aún se encuentra en sus primeras etapas, se requerirán datos adicionales para comprender mejor estas tasas de éxito. En general, los dos elementos más críticos para determinar la probabilidad de un parto vivo son la edad de la mujer en el momento de la congelación de óvulos y la cantidad de óvulos accesibles . 
 
 

¿Cuánto tiempo se pueden almacenar los ovocitos? 

Mantener los huevos durante períodos prolongados no parece tener consecuencias perjudiciales. Sin embargo, los datos solo se pueden almacenar hasta por cuatro años. Cabe señalar que una mayor edad de la madre durante el embarazo está relacionada con un mayor riesgo de problemas del embarazo, como presión arterial alta, diabetes y parto por cesárea. La mayoría de las clínicas tienen un límite de edad máximo para usar estos gametos para producir la concepción. 

¿Eficacia de la crioconservación de ovocitos? 

La criopreservación de ovocitos ha demostrado ser más difícil que la criopreservación de espermatozoides, en parte porque varios regímenes inducen daño a la zona pelúcida del óvulo (es decir, la cáscara). Sin embargo, actualmente hay una variedad de técnicas de crioconservación disponibles para conservar ovocitos maduros o inmaduros. Si bien las tasas de supervivencia de los ovocitos inmaduros han alcanzado el 60 %, el método de congelación cambia con frecuencia el proceso de desarrollo de los ovocitos, y las tasas de fertilidad y de nacidos vivos de los ovocitos supervivientes suelen ser más bajas que las que se obtienen con los ovocitos frescos. 

 Investigaciones recientes que recopilaron los resultados de todos los ovocitos criopreservados utilizando una metodología de congelación lenta entre 1997 y 2005 encontraron una tasa general de nacidos vivos después de la descongelación del 1,9%, que es mucho más baja que la tasa alcanzada con ovocitos frescos. Los avances recientes en la utilización de procedimientos de vitrificación (es decir, técnicas de congelación rápida) han aumentado las tasas de supervivencia posteriores a la descongelación, con una serie de estudios recientes que informan una supervivencia de ovocitos >90 % después de la vitrificación, con implantación en hasta el 11 % de los ovocitos descongelados. 

Procedimiento de crioconservación de ovocitos 

Protocolos de congelación 

El tiempo necesario para congelar los tejidos varía según la crioconservación empleada y las células que se congelan. Los métodos típicos de congelación pueden ser graduales o rápidos y, por lo general, implican envolver los tejidos en pajitas para protegerlos. La congelación lenta incluye bajar gradualmente la temperatura de los tejidos reproductivos y los crioprotectores. Los tejidos, por ejemplo, pueden colocarse en crioprotectores a temperatura ambiente y enfriarse a una velocidad de -2oC/min hasta llegar a -7oC. La tasa de disminución de la temperatura luego se reduce a -0.3oC/min hasta alcanzar -30oC, luego se acelera a -35oC/min para alcanzar -135oC. Finalmente, los tejidos se sumergen en nitrógeno líquido y se almacenan a -196oC. 17 

Los tratamientos de congelación rápida, también conocidos como métodos de vitrificación, por otro lado, sumergen los tejidos reproductivos y las crioconservas en nitrógeno líquido a -196oC. La concentración de criopreservantes se eleva para evitar el desarrollo de cristales de hielo en las células. 

Almacenamiento de tejidos humanos 

Los tejidos humanos se congelan y se mantienen en nitrógeno líquido a -196oC o menos. 

Protocolos de descongelación 

Un enfoque común de descongelación consiste en sumergir las pajuelas que contienen tejidos crioconservados en baños de agua y aumentar gradualmente la temperatura hasta que alcancen la temperatura ambiente. Para disminuir el impacto dañino sobre los tejidos reproductivos, la concentración de los medios de crioconservación en los que se almacenan se reduce gradualmente al mismo tiempo. 

Medios para crioconservación 

Los tejidos se pueden criopreservar usando una variedad de métodos. 

1. Glicerol 

En la década de 1940, el glicerol fue el primer crioconservante utilizado para congelar gametos humanos, lo que resultó en la criosupervivencia de los espermatozoides humanos. El glicerol sigue siendo un criopreservante popular para los espermatozoides humanos, y algunos nacimientos han resultado de espermatozoides descongelados criopreservados en glicerol durante largos períodos de tiempo (p. ej., >20 años). 

2. Dimetilsulfóxido (DMSO)

A principios de la década de 1980, se creó el procedimiento DMSO. Durante muchos años, se utilizó eficazmente como crioconservante. Este procedimiento se empleó para los primeros nacidos vivos de embriones crioconservados, así como el primer nacimiento vivo de un ovocito crioconservado. El DMSO ya no se usa debido a la preocupación de que pueda aumentar la posibilidad de anomalías genéticas, así como porque las tasas de supervivencia e implantación del protocolo fueron bajas. 

3. Propenediol (PROH) en diferentes concentraciones con o sin azúcar

En la década de 1980, el propendiol se utilizó inicialmente como crioprotector. Reemplazó efectivamente al DMSO y sigue siendo el medio más utilizado en la actualidad. Según la investigación, los tratamientos que contienen sacarosa son más eficaces que los que no la contienen, aunque las tasas de éxito varían según el contenido de sacarosa. La supervivencia de los ovocitos, por ejemplo, mejoró significativamente cuando se utilizaron concentraciones de sacarosa 0,2 M o 0,3 M frente a sacarosa 0,1 M (71 % frente a 25-50 %). Sin embargo, existe la preocupación de que mayores concentraciones de sacarosa (es decir, 0,3 M) puedan afectar el desarrollo del embrión. 

4. Medio deficiente en sodio: colina

Recientemente, los científicos que buscan mejorar las tasas de éxito de la crioconservación de ovocitos han utilizado métodos de propendiol/sacarosa en los que el sodio se sustituye por colina. Esto se debe a que nueva información sugiere que la sal tiene una influencia perjudicial en el proceso de crioconservación. Hasta la fecha, no se han documentado nacidos vivos como resultado del uso de dicha criopreservación, y no hay datos suficientes para comparar los resultados de este medio con otros regímenes de criopreservación. 

Beneficios asociados con la Criopreservación de Ovocitos 

Las técnicas de criopreservación revolucionaron la terapia de FIV al permitir que los gametos o embriones generados pero no utilizados en un ciclo de tratamiento de FIV se conserven y utilicen en tratamientos posteriores. Hay numerosos beneficios asociados. 

• La eficacia de la reproducción asistida 

La crioconservación mejora la eficacia de las terapias de reproducción asistida al permitir que todas las células se recuperen y/o fertilicen durante un ciclo de tratamiento, pero que no se utilicen, para conservarlas para su uso en un ciclo de tratamiento posterior. Esto elimina sustancialmente la necesidad de que los profesionales realicen la estimulación ovárica y la recuperación de ovocitos, que son costosos y físicamente exigentes para las mujeres involucradas. Antes de la criopreservación, se requería la recuperación de ovocitos para cada ciclo de tratamiento, y los ovocitos que no fueron fertilizados o utilizados fueron descartados 

• Se reduce el riesgo de síndrome de hiperestimulación ovárica. 

El síndrome de hiperestimulación ovárica (SHO) es una enfermedad peligrosa que, si no se trata, puede causar la muerte. Es la complicación más prevalente de la inseminación artificial. El OHSS se produce como resultado de la estimulación ovárica con productos farmacéuticos, y su aparición puede minimizarse potencialmente limitando la frecuencia de la estimulación ovárica o dando a las mujeres un período de descanso entre la estimulación ovárica y la implantación del embrión. Debido a que los embriones se crioconservan de un ciclo al siguiente, no se requiere estimulación ovárica cada vez que comienza un ciclo de tratamiento, y si los ovarios de la mujer están hiperestimulados, la implantación del embrión se puede posponer sin desperdiciar los ovocitos recolectados. Sin embargo, un estudio reciente concluyó que no había datos suficientes para justificar el uso generalizado de la criopreservación como método para evitar el síndrome de hiperestimulación ovárica. 

• Conservación de embriones con fines científicos 

La criopreservación permite mantener embriones por motivos de investigación o para parejas que conciben durante su primer ciclo de tratamiento y tienen embriones congelados sin usar para contribuir a la investigación. 

• Reduce la implantación de embriones múltiples 

Múltiples embriones implantados en cada ciclo presentan riesgos para la salud tanto de la mujer embarazada como de sus fetos, incluido el potencial de embarazo múltiple y problemas relacionados, como aborto espontáneo y bajo peso al nacer. Antes de la introducción de los procedimientos de embriones crioconservados, había un impulso para implantar todos los embriones disponibles, ya que los embriones no utilizados no podían salvarse. Sin embargo, actualmente es una práctica común implantar solo uno o dos embriones y criopreservar los embriones sobrantes para futuros ciclos de tratamiento. 

• Preservar la fertilidad 

La crioconservación permite a las personas cuya fertilidad está en peligro conservar sus células reproductivas para que puedan concebir con tratamientos de reproducción asistida en el futuro. La preservación de la fertilidad se administra cada vez más a pacientes prepúberes y pospúberes que soportan radiación y/o quimioterapia. Las mujeres que deseen posponer el parto y/o tengan antecedentes familiares de menopausia precoz también pueden utilizarlo. 

Las limitaciones y peligros de la crioconservación de ovocitos 

La investigación actual encontró ciertos vacíos en la evidencia existente sobre la criopreservación de ovocitos. Solo unas pocas mujeres han seguido para usar sus ovocitos congelados para una futura concepción. Como resultado, tenemos menos información sobre los resultados del embarazo a largo plazo de los ovocitos congelados. Además, la tecnología de congelación de ovocitos ha mejorado con el tiempo, lo que hace imposible generalizar los resultados de los ovocitos conservados por congelación lenta hace muchos años y anticipar los resultados de los ovocitos recién vitrificados. Hay muy pocos estudios prospectivos de alta calidad sobre los resultados de los recién nacidos después de utilizar ovocitos congelados. Se necesita desesperadamente una investigación aleatoria prospectiva a largo plazo para investigar la tasa de fertilidad, la tasa de nacidos vivos y el efecto a largo plazo en los niños nacidos por criopreservación de ovocitos. 

Si bien la crioconservación se ha convertido en una parte estándar de las técnicas de reproducción asistida, y las técnicas de crioconservación han mejorado mucho en las últimas décadas, las tasas de fertilidad, implantación y/o nacimiento vivo de células reproductivas congeladas y descongeladas siguen siendo más bajas que las obtenidas con productos frescos. Esto es especialmente cierto en el caso de la crioconservación de ovocitos. El almacenamiento de tejido humano también puede ser costoso y no está cubierto por Medicare. Los peligros son comparables a los asociados con la estimulación ovárica para la FIV, incluidos riesgos menores de síndrome de hiperestimulación ovárica (agrandamiento de los ovarios y acumulación de líquido en la pelvis y el abdomen), infección y sangrado durante la operación de extracción de óvulos. 

Cuestiones de ética y legislación con la Criopreservación de Ovocitos 

La crioconservación plantea una serie de preocupaciones éticas. Como resultado, la congelación y almacenamiento de tejidos humanos está estrictamente regulada en todo el mundo. Los pacientes deben recibir información confiable sobre los resultados de las terapias de reproducción asistida después de la criopreservación (p. ej., tasas de nacidos vivos, resultados de los niños concebidos mediante los procedimientos) para que puedan tomar decisiones informadas sobre el almacenamiento de sus tejidos. 

• Propiedad de ovocitos congelados 

La preservación de tejidos humanos plantea cuestiones relativas a la propiedad, en particular en relación con los embriones. La pareja que guardó los embriones conserva la propiedad de los embriones, y los embriones solo pueden utilizarse o desecharse con la aprobación de ambas partes, hasta que se alcance el límite de tiempo para el almacenamiento, en cuyo caso deben desecharse. 

• Etiquetado 

Es fundamental que todos los tejidos reproductivos conservados se etiqueten minuciosamente, especialmente para garantizar que se pueda identificar a los propietarios de los tejidos almacenados. Las clínicas también deben verificar que sus etiquetas no se cambien fácilmente. 

• Almacenamiento de tejidos de una persona fallecida 

El proveedor conserva la propiedad de los tejidos gonadales congelados y las clínicas están obligadas a deshacerse de los tejidos crioconservados después de la muerte del médico. Solo si la fuente del tejido ha manifestado claramente su deseo de que los tejidos se utilicen en caso de muerte (por ejemplo, con fines de investigación) pueden almacenarse o recuperarse para su uso. 

• Tiempo de almacenamiento 

Los tejidos humanos pueden conservarse durante un máximo de cinco años. 

• Consentir 

Cada persona que preserve tejidos gonadales debe obtener un formulario de consentimiento por separado. 

Conclusión 

La crioconservación de ovocitos se ha convertido en una tecnología bien establecida durante las últimas tres décadas. A pesar de la creciente concienciación sobre la fertilidad, los servicios siguen estando subutilizados. La necesidad del momento es mejorar la colaboración interdisciplinaria entre oncólogos y expertos en reproducción, así como una mayor disponibilidad de servicios de congelación de ovocitos. Durante la última década, la vitrificación ha sido la principal técnica de criopreservación de ovocitos en todo el mundo. Aunque un sistema de vitrificación cerrado proporciona un entorno aséptico, la vitrificación abierta es el método más utilizado. El OC planificado parece ser apropiado para personas entre los 30 y los 30 años. Puede recomendarse a una edad más temprana en individuos seleccionados con reserva ovárica disminuida que corren el riesgo de desarrollar insuficiencia ovárica primaria (POI). Se debe alentar a las pacientes a que guarden entre 15 y 20 ovocitos maduros para tener un parto vivo exitoso. Varias investigaciones han revelado que los ovocitos congelados-descongelados tienen tasas aceptables de fertilización y embarazo.